定量PCR檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)方法

　　定量PCR檢測試劑盒常用于熒光免疫法中標(biāo)記抗原或抗體，亦可用于微環(huán)境，如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質(zhì)活性位點(diǎn)等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數(shù)大，熒光量子產(chǎn)率高；熒光發(fā)射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移；用于免疫分析時(shí)，與抗原或抗體的結(jié)合不應(yīng)影響它們的活性。
 

　　定量PCR檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)方法：
 

　　1.取增菌液1ml加到l.5ml無菌離心管中，10，000rpm離心5min，棄去上清；加入50ulDNA提取液，充分混勻后沸水浴5min，13000rpm離心5min，取上清液進(jìn)行檢測或保存于-20C以待檢測。
 

　　2.將PCR反應(yīng)液置室溫平衡，融化后取Taq酶，按2U/管加入Taq酶，即每個(gè)測試反應(yīng)體系配制為：PCR反應(yīng)液22.5ul+0.4u1Taq酶。
 

　　3.加入模板：將保存在-20C的核酸提取物置室溫解凍，以13000rpm離心5min。陰、陽性對(duì)照使用前置室溫解凍。在每個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入步驟1中處理過的模板或陰、陽性對(duì)照各2u1，蓋好管蓋，置于PCR儀上，記錄相應(yīng)樣品號(hào)。
 

　　4.上機(jī)擴(kuò)增、檢測區(qū)：反應(yīng)條件為95C：3min，1個(gè)循環(huán)；95C：5sec，60C：40sec(信號(hào)采集)，40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)體系設(shè)為25u1。對(duì)于多通道熒光PCR儀，信號(hào)采集時(shí)設(shè)定為Fam熒光素。
 

　　定量PCR檢測試劑盒使用注意事項(xiàng)：
 

　　1.本試劑盒僅用于體外檢測和研究用途，開始使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書全文。
 

　　2.實(shí)驗(yàn)必須嚴(yán)格分區(qū)操作：PCR前準(zhǔn)備區(qū)一一準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)試劑；樣本處理區(qū)一一待測樣本、模板處理；檢測區(qū)一一PCR擴(kuò)增、檢測。
 

　　3.有關(guān)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范請(qǐng)參照國家相關(guān)部門頒布的基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。